Ministerial Decree establishing methods for the evaluation of the microbiological and composition characteristics of natural mineral waters and for the relevant taking of samples

G.V/1:T\ L1 r1n ,1 E :>' 1 i, R1 Pt ·11H11c, I 1 ,11,,, :\!l'.\/JSTERO DELLA S.\'.\/ITt\. ~~<J Gi di analisi per la , alul:11\onc de lie car,iltcristiche in icrobinlogiche e di composiliOll C dclll' ac que minerali nat:irali e modalita per i rela ti,i prelc,;im;,nti <lei c:m1pioni. IL \llt\i!STRO DELLA S.-\'-ilT\ Vistn ii d·:ncto lcgiaL1tiH) 25 gcnnaio 1902. 11. 105. rccantc dis1wsi1ioni p..:r l'atluazionc dclb Jirctti,a n. 80, 777,'CEE rclati,a alla utilizzazionc c alb commcr ciali11;11ionc dcllc acquc rnincr,ili naturali. Visto in p;1nicobrc !'art. 2. tcrzo cumrn,1. Jc! cital,) Jccreto n. 105. che. ai fini de! riclrnoscimcnto dclle acque minerali n;1turali, prevedc l'emanazione di norme conccrncnti i mctodi di analisi per la valutazione dclle carattcristichc microbiologiche e di composizionc delle acquc minerali stcssc c le motlalit,1 per i relati,i prcle, amcn,i di campioni. Yisto !'art . .3-1- dcl rcgio• decreto 28 scttemhre 1919, n. 1924. Yisto l'.irt. (1, lettcra I), della legge 23 diccmbrc 197::<. n. 8.33. Vioti g!i ,trticoli 1 c .3 dcl D.C.G. 7 nO\crnhrc 19.39. n. l 85G. Sentito ii p,1,·crc de! Cons;gfio sur:rinre di sanit:'1 in d:t ta :..i g1 ugno 199~. CAPO I METODI DI ANALISI PER LA VALUTAZIONE DELLE CARATTERISTICHE MICROBIOLOGI CHE E DI COMPOSIZIONE DELLE ACQUE MINERAL! NATURALI. Art. I. Ai fini de! riconoscimcnto dclle acque mincrali naturali, le ana!isi microbiologichc debbono csscrc escguite sccondo le seguenti modalita: I) Carica microhica. Seminarc in Plate Count Agar (tecnica agar gcrrni) aliquote da I ml de! campione in quattro piastre di Petri. Incubarc due piastre a 37 °C ± 1° per 24h ± 2h e due piastre a 20 °C ± l O per 72h ± 2h. Procedere alla con ta dclle colonic. 2) Coli/<mni in 250 ml: A) Metodo con terrcno li4uido. Scminarc due beutc provviste di campanula, contcncnti ml 125 di brodo lattosato a tripla concentrazionc, rispettivarnentc con ml 250 dcl campionc. Incubare a 37 °C ± 1° per 48h ± 2h. Le hcute positive (torbidit,1 c prcscnza di gas) de~bpno csscrc: ~()tlop,),:c: suhn,l!u:: 111 hr()do Lttt,)SJl()-bik \:rdc hri!L1nte d:1 in,:uh,1re :1 ~~ ''C = I" per 4~h :::: 2h ed a 44 °C ::::: 0.5° per 4~h = 2h. D:1!!e c,)\turc positi,e pruccderc 2h ed a 44 "C = 0.5" per 4:-:h = 2h. D,tlle C()lture po,iti\c prnccdcrc ,1!\'i,nbmcnt,) su ag,1r :\Lie C,)nkcy e alls: p1·n\: biochi1111~·hc di Cl111t'crn1,1 (H2S. indolo. orn1t:n,1 dc:c1rh)ssil:1,il. B; '.\lellxb .con mcmbr,111c liltr,int1. Filtrarc due aliquotc di 2~0 ml ci:1scun:1 di ec1rnpiune :1,t1·:1\erso mcmbr,rne liltranti (0.4~u). Purre le due membrane, rispcttiv:1rncnte. su piastre di «,1g:1r hlll),:tl,) ,ti tcrgi tolo 7,, da incubarc a Yi "C = I" per 21h = 2h e di <<agar lattos;tll) al tergitolo 7 -'- clururo di tril'ernltctr,11,)\io» da incubarc a -1--1- "C = 0.5" per 24h = 2h. Prelc\ a1·c le colonic gialle su AT7 c quelle d;1l gi..1llu al ros~o su .·\ T7 -'- TTC e scminarle in hrodo lattos,1to-hilc \Crde hri!Lrnte da incuharc rispetti,amente a .36 "C = 1° per -I-Sh = 2h ca 44 °C ± 0.5" per 4Sh = 2h. D:tlle colture positi,c proccdere allc prove di conli:rma come per ii metudo in tcrrcrw liquido. 3) Sin'JJforncchi ,frculi in 250 ml: A) l\letodo con tcrrcno liLJuido. Semi1urc 2 heute contencnti ml 125 di hrodo glucosio-a1ide a tripla concentrazione rispctti,amcntc con ml 250 del campione. lncubarc a 37 "C :::: 1° per 48h :::: 2h. Le bcute positi,e (intorbidamento de! terrcno) debhono csscre sottopostc a Ile. prove di confcrrna mediante striscio 111' agar bile csculina-azide. lnbubare a 44 °C :±: 0.5° per -1--1-h ± 4h. Consider:1rc positive le colonic nere c,i talasi neg:1 ti, e. B) Metodo con membrane filtranti. Fiitrarc due ali4uote di 250 ml ciascuna de! campionc ;1ttravcrso membrane filtranti. Porre le due membrane. rispettiva mente, su due piastre di «KP streptococcus agar» da incubarc a 37 °C :±: IO per 44h ::::: 4h. Sottoporre le colonic sospette, rosse o rosa, alle prO\e di conferma C()me peril mctodo in terreno liquido. 4) Spore di c!os!ridi snlji10-rid111!ori 111 50 ml. Riscal<lare ml 50 dcl carnpionc a 80 °C per 10 minuti. Raffreddare rapidarnente c liltrarc per memhr,1na. Porre la membrana su agar SPS ricoprcndo con,altri 10 ml di SPSa45°C.lncubarca37"C ± l 0 per24h ::!: lhingiare per anaerobiosi. La prova viene considcrata positiva quando si sviluppano colonic ncre. ldentifirn:::ionc prcsuntirn di Cl. pcrfrigcns. Prelcvare le colonic sospette (nere) e seminarle in tubi contencnti brodo tioglicollato previamente riscaldato a 100 °C per 10 minuti e rapidamente raffreddato. lncu bare a 37 °C + IO per 24h ..j 2h ed cseguire subcolturc in: agar nutritivo a bccco di clarino, da incubarc a 37 °C + [0 per 24h ± 2h in giare per anaerobiosi, per vcrificare la ncgativita dclla catalisi; 30 c; \I II I I-\ U1 ii( la\l L I)[ II\ RI l'l 1;,n !( \ I I \II\'\\ prC,\L'lla di Lttll' t,m1,1,,,lat.i ricopcrtn con ml 2 di ,a~clina, da incuharl' a 1,7 "C ~ l" per 24-48h, pl'r ,crilicarl' l',!L'i,lil'ica1i,,n.:- c l,1 forlll:11io11e di cnagulo fra 111 l11CII l ,I[, l. Filtr,tn.: ml 250 Lkl calllpinne e porre la 111c111hrana su agar-c..:trimid..:. Incubarc a :;7 "C -:= I" per 48h ± 2h. Prek, are le u1lonic sospctt..: (, erdi-bluastre c u lluorc scl'nti agli liV) c trasl'l'rirlc ,u nutrient agar a hecco di clarino. lncuhare ;1 -1.'. < · :) ~-· r,·r -lilh 2h. Dalla • :ilLt , ,'r!!"1L·a dell:! p•,1-1!1, iu Lkll;1 i'"i,l::,i ·,,1 l·,1rtin..: a Ila hil11L'li!· p-l-L'llilcndiami11a: ,dla identili..:a1io11c rncdi,1nl<.: ,,ga!lcna» d1 t<.:,t hiuchimici (·\PI 20 :\I: ll ..:qui,:tkntil. :\l'i L'a,i dubhi ..:scguir..: a11d1e: J'..:, id..:111i,11inne dclla JW,1Lh11ionc di piocianina a :;o ··c in ll'rl"L'il() di King .\: la pnl\,I di ncscita in :\utricnt h1<1th in h.111. a 42 ''C (ripctuta tr..: ,nlt..:): ii t..:,t di th,ida1ion(' de! gl11cthio a 1,7 "C (Tcrrcno al blu di bronll1timolo). 6) .\taf}hilwocrns ,111rcw 1n 250 ml. Filtrar..: ml 250 dcl c1111pione c pPrr..: la mcmhrana su BairJ-Parkcr agar. l11c11harc a 1,7 "C ::: I" per 24h ± 2h. Pn.:k,ar..: k n1lo11ic snspcttc (n..:rc, gcneralmentl! con alone) ..: scminark in Rrain-Hcan infusion broth. lncub,trl' a 1,7 "C ::: I" p..:r 24h .:: 2h. Dalla hrodo..:oltura ('sl'gu1n:: prq1ar,1tt1 miL-ros..:npin1 pr..:, i:1 col,1ra1ion(' di Gram: ,,cmina in rrofondit:i in prm..:tta di agar di l\losscl c \bnin p-:r -:,id-:111iarc ii tipn rc~piratnrio; lL',t ,klla cnagulasi. .\i ti11i Lkl riL'lllhhci111,'11t,, dcllc ac:quc mincrali naiurali, k ,m;ili,.1 chinii.:hc c li~i.:1.1 chirnid1c dd,bon,1 ,.:s-;-:r,: L',cgt:i t..: ,cc, ,ndn i ,cgUL'il ti m,:tc.,I i di misur:i: j)J~l'-,[i,H1, ,!] !"-'llll,li1.:-1,1,:{1' di j 1(l t.1•.··!1} ·11tii: :,.:t:1.1 ,11111 .~.:--. c1 111 i111..L1.:.11~;rL· l' J1t•\-, ·1~/l(ll1klh1 '...,: 11..·!th,1'{1i\,i1h.'.l11.1 lii c1,s,1:i·,i111:..:1llu 11 '! l l j l'1 • .'I) l:t r ~• I 1h1Lt/i1!I~ ... • 1...\)JJ pl 11111.:lro I 1tri111 ... ·t1i.11.lll1 indi\..·;1t1 1r .... • n p1t1L·111ill lll1...'lr(1 L1ri111L·Ln,t 1..:on nitr.th1 di rn-..·1\:u11n \",,lunh·tri« "'c. \!til<r (ir;1,i111di-i,1 Ctlll 1..·lururl1 ,Ji h,1rio \lctPdP tu1hidrinh:tri1...·o Sp~·1t11..11'1ltn111.:t ria di ;1..,sorhiml·ntu ~\.l1..,n:H.:,1 ,, di c...·1ni-..:-.ioni.: ll) I .\llu1ni11i,1. ::'ii) Brn111<1 .. ~-') l·1...•111•li (c . ...;,Ju\i quclli n:1 tur:di '..'hl' 111~11 IL'll~~i:-.n 1 11u l·11n ii clnr,;1 : \) -\~c·nli :,·11,;,,,;11,-,; 11\1 ll \S dllit i!l'I 1 ~5) ()Ji ini1L'l ::ii - idnk·;;rht:ri ~lh.. '!t1lti (, l'!)ll?:"11111::ti ~h) IJrnc.1rl 1 ~;ri ~t:·n1~'.~i~iLi j1(' !'.c;l -!i,.:i 27) Pl:•,tic1di 1.: l11i~·:1i!i i1,.-:i,.:!n rur:11i .2''\) ( llllq·•d,ti di~'.1110~dd,~i ' P,lli •~he 1:t1n ri(:1tLUh1 n: ·!t1 \ rn:L' 1x,1 iLid1 21)) \r...;L'lliu·, 1P) B.,rin ..... . ~~p,.:i 1.r,,f.il11:11i...1 ria d1 ~!...;:-.1';-bimcnl1..l .d:)n:iL'd n di 1...·mi .. ·,1, ,~· ~i•dtr\1(,1to111~'t11~1 di .it1..1mii~·u !,;;i:·11-ctru c·,,;i LJ)L\ Sr1cl lf()!.llt~ll1Ll'l 11:t di ,.·rhi111ci1t1) D~h.·11ni1~a1in1ll' l-~,~1 -.:\,:llr1Hh, ,p, . .' nli,o SpL'l t n i!'utdllll'!, ia nit 1!,.x11L111..' dl'l l·n:npk·, ... u :!li1;t1 ill,i I.P:l:111111 n 1..'i)ll , I];; ,I ri P;t -Ii l"l"\ ~11 j~ l Spcttrofntt1n11.:tr1.1 di .i:-.·111 i1ii1h..·nto 111tlk·ctliarl.' L\lll i11tluk11ohl o n:~1tti \O di ;\c~:-.kr hl' llL'l'\•-., ... ann dnpo di.,t ili,uillnc·) Spcltru:·01llllil'li !.I di :1~'>11rbirn,.:11(i.l 111,,kcnlarc Spl'llnlrlll11mctria d1 d~'.'\ill"hi:11c11tcl llll>icl'.olan: Ltl11 n:-.:-.alalo di p. dimctilammi11,i:1nili11a Spdtn,r,,t,11llctria di ;c,,nrhimc•nto ;1tnmil.·o Sp1..·11rtlfl1tnnh:tria di ;i .... :-.nrhinwnt,1 ;1tomil.'o Spl'llrtlCtiltlllh.'tri;1 di ;1ss,)rhirni..·11hl altl1'1)i1..·tl Titrimctria Spdtrnfotnmctria ,!';:,,, ,:-hi:ncnt,, nHll:..·c,,!are l"itrimc1ri,1 Spdtrnf,ll<>mctria mnk,ol,irc Titrimctria l.'lltl nitratu d"ar~~nhl e p-d i m c Ii I a 111 m 111nhe111; Ii d c 11 rodanina Srh.·ttr-if\)t~\i11L.·:na rn1.·kl."uLtrl.:' cnn l.'.1..lr.ill!!ll.l T L' su~·t.\ ·...,...,1\;1 rca.1in11c l"t '11 f'iti:..]i l!:l \h.·tt•l'.,1 C1lJ1 cl...·11r(1d1) ...,111..·L·1f1L1.> ;--·i'i.:llrd!°l1tl·nh:!1•.1 rnt•k.. ·,)L1r.: cun '--l<1:~1i11nanlipiriru n r. 1:itr, 1~111iii11a f )~'ll'f"T11iil,1/id!11..' ( ;( l' } I PI ( \L.:r..,,.i,, .... :--,l·ttr<'l°1iL•n: ... t,i~·,, ai hlu di il;(.'ld .. ·11 .. : r . 1:·:11i, 111:...· l' l !\.-:1.·1 :~1; u .1.✓: )) :, , 1 ·1 l} i 'l>:t t: ,,!~ll,H~: ... ·tria infr;1r()...,-.,;1 Sp ... :ttr.ll"lilnn1..:t1i,1 di fl:1,)1.. ·...,1..· ... ·11/a d,1 rd !·,urili1~.1.--;•.~111-· -.,u -.,tr~itll sottik DL·k1 llli11:1,- i1)J~1.· ;~l·; \ i:1 ~.i...,-cromato f'.'. .tlic-1 f)l'l1...'i lll1i:.i1iun1.: p1...r-.. ia ~~•:---crumato ~rr:diGl 1..\\)p\~ l'.-..iC~/i\)nl· t! con la tct·11i.. ·~1 tkllo '-p:11i,, di t~sta Spl·t: r..1rph 1ml'tri:1 di ~h,.,1lrhirncnto ~1t,1micn cPn la lcl.·nic1 c..ki!li idruri Spcttr,)\'ntnmdri:1 mnkc,,k7rc con dictilditiocarha111111;ct" di :irgcnto Sp,l trufot,,111,·1 ria di :1ss,1rhimento a1on1ic<, \ktodo turhidim.:tri.:o (J\//, II\ l ill(l\11-. DU.I\ Rli'I HHlll \ 1,,,:,--,\ .11) Bor;111 .16) i\itra!i, .17) Nitriti :-,pd: l"ll(l ,l1.'iJ11.. t ri.i Ill( ,i, ,, ·1 · !,:r; • l'; 111 1.tc1 d,, c!r111i11i\.'n Sp;, •! I rPfntrHll·:i ri;1 di :1, ,: ,r1'illlL'lltn alll!TllC) Spl'tl1ol·;~h,:11e11;.1 di ;!'>,1HhimL•11i.D :!lnn1icn sr,cttroi'Pll':lh'!rl.1 111n 11..•-.·pLir·.· l't)Jl di kni!c1 rh:uidc Sj'·~·ltr1.,f.,!1.,rn1..·1r i;1 di .1·..,<H:,;:th.'lllo :!l1liPit.·11 Spl'i i;"(l i·\ ~1' l!'.· .. .-: Ii:! d ! ~· ........ ):·hi1 :!1 .. .'I:; \) l~~•·,k·l·,,]:1:~ ,:,~;; fn; i 1';1\l -~ 1!i'.,I O r-, ... ·r\t,]1';1lP di ;1n1;1H11.•·, '.~;1,.:tlrilt"1.iL1nH.:~1 i:1 1;1111, ,·,:!~:· .: ~11 -.• l11 ul dn di s1.~d1,, S1·-.:tt,P:,11nm('tri.1 m<,it,.·.: 1:::L' di;\•il.a l!:l\i.•,. 2 l ~} Lill SpeilrPfultH11:..•tr;,l L 1:1kL·· ,Ll!·,: lt ·ll aci do :--d:i.111di1..·1.l c :mi1~111L.t ~')r,':tt•·nr1:tl'll1l..'!r:;1 t 1! ;:·,-..1:·hiiri. nl:l ti!l.lllliLO 'rcH!"( 1 !·11 :(,:':· tri:i Lil :!·--,-:·h !l:-...•n{1 ) I atn,n!~o Cd1l l.1 t,.:c1!c.1 lk~;; i,~n:ri ~t)-.'ltrP!'n!t'llletria n:Pi..:---·ti:,:/~ :ii ::!.3 diam111..J:1,tl"l:i k·nc Per cscguir,,; k analisi dcl pr,.'~cntc ,1rticnlu s1 puo 11li!i11:irc, qu,indo possihik h c·omaln :!r;i!1;1 1,i:1:•;:1, Art. 3. I! pr, .. --1...:,,~:~rtL~iitn dc1 L'J:11p!•.~::i d...:lL~ :t:, .. \ i\·-~ L: : ... ·1~1'.t ll,tl,11,,li. d:t :i,uiilldl\'. ~Ii r:,,i l:,:lla \,,:t:L,/!,':,C: L:c:lk cara!lcri ,,ich..· 1.·1icrnhiol,1 c'i~-::•: ,,; di c,11:1:1,· ,11:, .; 0 ,: ,\:i!c ~tC'.'-.'.h., ~- c:·:·,.:l~l!,:lt> t!dl r(L'\0,1 .. 1'..: Lci:, i ) :.:i;, · ;'.i,) d1...l t1bor·!L~ri,) Ll1c c~L~.!UC L: ~liL::1")1. f1 f.i.. ';\..\ ... ,l!l. -i}(,~ i: L'if~\;d..i d (.l,: .. ! }• , ·•,1.~:i.'d ::·.. li.1~\,I ,~.!. sa11il,,ri,1 v,111n-:,..:,1lc 11,:r i..:rrilor,,1. cl,c rcci;g,: ,i \Crh:ik di l'i ~J. · \ ~1:: :1..:; i: , ,. Ar'.. II vcrh~tlc di pr:::cv 1:11c:1ic, dc·.c i'hfic~lr, ' !": :· t 1..Lt·.a tl ·1 I''',, . t .. , l',1"' ') i 1· ·.) '1•' , /( ·1 · .. l 'I' ' ·1 • I' ,.. . I • l ·•'-" c.~ !,,-.... ,,. --~·- 'l\., :-:.~-~-~ ·-•u11:, .• I... ~ l1'-·•: :.:.:..-,1..: lo>.:! r,n.>.:c:~1 1, Ll ,': •· .... •;·· .,! -~:- ·.!..· ·: ·.• . ..::·al:: .. ·, '.p~~~.,· ~,~·.: '-' ·; :--.-. c~:1tta u1~>~·:l "i•.:nc ~i-.:1 !•.~rr;L\'I t), !'.. '. !'.!',)1 :~::i. · -1 r,:'!.:!· ·\ ~: 111::n~t.'~ i 1<~:.:tJj t~cl:c lL:t.21-r.1 ~l~L•i; --,;:i .:-;cf1i ,\. ·.i,1 ;~,-,,. 10. d;1ti 1nc,..;,\;·plo:2ici ,. pill\ iumctriu, an:.:hc r,-:ati, i a, gi0rn1 prcccdcn;i prc:.:i,:rndo in panicolarc la d,1ta c la Jurata tkilc ultirm: prccipit.vi,rni, cd ogni altro c!:.:mcnto ritcnut,1 ulil.:: ii ,crhak c li1·mat,1 d:1i prc,cnti al prdc,arn:ntn, Art. (1, II prc~c:,tc d-:crcto ~ara puhblicatu ncll.i (,11::::('I/U L'/1< i<i/c ddb R..:pt:hhlicL