Residue limits of fishery drugs in aquatic products of pollution-free food - National Agricultural Standard NY 5070-2002

29/10/2018 無公害食品 水產品中漁業殘留限量 http://aquamed.nvri.gov.tw/Module/PrintFriendly/Print.aspx?pid=gALRMsP%2bcy0%3d 1/10 無公害食品 ⽔產品中漁業殘留限量 NY5070-2002 無公害食品 ⽔產品中漁業殘留限量 1 範圍 本標準規定了無公害⽔產品中漁藥及通過環境污染造成 的藥物殘留的最⾼限量。 本標準適⽤於⽔產養殖品及初級加⼯⽔產品、冷凍⽔產 品，其他⽔產加⼯品可以參照使⽤。 2 規範性引⽤文件 下列文件中的條款通過本標準的引⽤⽽成為本標準的條 款。凡是注⽇期的引⽤文件，其隨後所有的修改單（不 包括勘誤的內容）或修訂版均不適⽤於本標準，然⽽， ⿎勵根據本標準達成協議的各⽅研究是否可使⽤這些文 件的最新版本。凡是不注⽇期的引⽤文件，其最新版本 適⽤於本標準。 NY 5029--2001 無公害食品 豬⾁ NY 5071 無公害食品 漁⽤藥物使⽤準則 SC/T 3303--1997 凍烤鰻 SN/T 0197--1993 出⼝⾁中喹⼄醇殘留量檢驗⽅法 SN 0206--1993 出⼝活鰻⿂中噁喹酸殘留量檢驗⽅法 SN 0208--1993 出⼝⾁中⼗種磺胺殘留量檢驗⽅法 SN 0530--1996 出⼝⾁品中呋喃唑酮殘留量的檢驗⽅法 液相⾊譜法 3 術語和定義 下列術語和定義適⽤於本標準。 3.1 漁⽤藥物 fishery drugs ⽤以預防、控制和治療⽔產動、植物的病、蟲、害，促進 養殖品種健康⽣⻑，增強機體抗病能⼒以及改善養殖⽔ 體品質的⼀切物質，簡稱“漁藥”。 3.2 漁藥殘留 residues of fishery drugs 29/10/2018 無公害食品 水產品中漁業殘留限量 http://aquamed.nvri.gov.tw/Module/PrintFriendly/Print.aspx?pid=gALRMsP%2bcy0%3d 2/10 在⽔產品的任何食⽤部分中漁藥的原型化合物或/和其代謝 產物，並包括與藥物本體有關雜質的殘留。 3.3 最⾼殘留限量 maximum residue Limit,MRL 允許存在於⽔產品表⾯或內部(主要指⾁與⽪或/和性腺）的 該藥(或標誌殘留物)的最⾼量/濃度(以鮮重計，表⽰為： μg/kg或mg/kg)。 4 要求 4.1 漁藥使⽤ ⽔產養殖中禁⽌使⽤國家、⾏業頒佈的禁⽤藥物，漁藥使 ⽤時按NY 5071的要求進⾏。 4.2 ⽔產品中漁藥殘留限量要求 ⽔產品中漁藥殘留限量要求⾒表1。 表1 ⽔產品中漁藥殘留限量 藥物類別 藥物名稱 指標（MPL）/ （ g/kg）中文 英文 抗 ⽣ 素 類 四 環 素 類 ⾦黴 素 chlortetracycline 100 ⼟黴 素 Oxytetracycline 100 四環 素 Tetracycline 100 氯 黴 素 類 氯黴 素 Chloramphenicol 不得檢出 磺胺類及 增效劑 磺胺 嘧啶 Sulfadiazine 磺胺 甲基 嘧啶 Sulfamerazine 磺胺 ⼆甲 基嘧 啶 Sulfadimidine 29/10/2018 無公害食品 水產品中漁業殘留限量 http://aquamed.nvri.gov.tw/Module/PrintFriendly/Print.aspx?pid=gALRMsP%2bcy0%3d 3/10 磺胺 甲噁 唑 sulfamethoxazole 100（以總量計） 甲氧 苄啶 Trimethoprim 50 喹諾酮類 噁喹 酸 Oxilinic acid 300 硝基呋喃 類 呋喃 唑酮 Furazolidone 不得檢出 其他 ⼰烯 雌酚 Diethylstilbestrol 不得檢出 喹⼄ 醇 Olaquindox 不得檢出 5 檢測⽅法 5.1 ⾦黴素、⼟黴素、四環黴 ⾦黴素測定按NY 5029--2001中附錄B規定執⾏，⼟黴素、 四環素按SC/T 3303--1997中附錄A規定執⾏。 5.2 氯黴素 氯黴素殘留量的篩選測定⽅法按本標準中附錄A執⾏，測定 按NY 5029--2001中附錄D(氣相⾊譜法)的規定執⾏。 5.3 磺胺類 磺胺類中的磺胺甲基嘧啶、磺胺⼆甲基嘧啶的測定按SC/T 3303的規定執⾏，其他磺胺類按SN/T 0208的規定執⾏。 5.4 噁喹酸 噁喹酸的測定按SN/T 0206的規定執⾏。 5.5 呋喃唑酮 呋喃唑酮的測定按SN/T 0530的規定執⾏。 5.6 ⼰烯雌酚 ⼰烯雌酚殘留量的篩選測定⽅法按本標準中附錄B規定執⾏。 5.7 喹⼄醇 喹⼄醇的測定按SN/T 0197的規定執⾏。 29/10/2018 無公害食品 水產品中漁業殘留限量 http://aquamed.nvri.gov.tw/Module/PrintFriendly/Print.aspx?pid=gALRMsP%2bcy0%3d 4/10 6 檢驗規則 6.1 檢驗項⽬ 按相應產品標準的規定專案進⾏。 6.2 抽樣 6.2.1 組批規則 同⼀⽔產養殖場內，在品種、養殖時間、養殖⽅式基本相 同的養殖⽔產品為⼀批(同⼀養殖池，或多個養殖池)；⽔ 產加⼯品按批號抽樣，在原料及⽣產條件基本相同下同⼀ 天或同⼀班組⽣產的產品為⼀批。 6.2.2 抽樣⽅法 6.2.2.1 養殖⽔產品 隨機從各養殖池抽取有代表性的樣品，取樣量⾒表2。 表2 取樣量 ⽣物數量/（尾、只） 取樣量/（尾、只） 500以內 2 500～1 000 4 1 001～5 000 10 5 001～10 000 20 ≥10 001 30 6.2.2.2 ⽔產加⼯品 每批抽取樣本以箱為單位，100箱以內取3箱，以後每增加 100箱(包括不⾜100箱)則抽1箱。 按所取樣本從每箱內各抽取樣品不少於3件，每批取樣量不 少於10件。 6.3 取樣的樣品的處理 採集的樣品應分成兩等份，其中⼀份作為留樣。從樣本中 取有代表性的樣品，裝入適當容器，並保證每份樣品都 能滿⾜分析的要求；樣品的處理按規定的⽅法進⾏，通 過細切、絞⾁機絞碎、縮分，使其混合均勻；⿂、蝦、 29/10/2018 無公害食品 水產品中漁業殘留限量 http://aquamed.nvri.gov.tw/Module/PrintFriendly/Print.aspx?pid=gALRMsP%2bcy0%3d 5/10 ⾙、藻等各類樣品量不少於200 g。各類樣品的處理⽅法 如下： a）⿂類：先將⿂體表⾯雜質洗淨，去掉鱗、內臟，取⾁ (包括脊背和腹部)⾁和⽪⼀起絞碎，特殊要求 除外。 b）⿔鱉類：去頭、放出⾎液，取其肌⾁包括裙邊，絞碎 後進⾏測定。 c）蝦類：洗淨後，去頭、殼，取其肌⾁進⾏測定。 d）⾙類：鮮的、冷凍的牡蠣、蛤蜊等要把⾁和體液調製 均勻後進⾏分析測定。 e）蟹：取⾁和性腺進⾏測定。 f）混勻的樣品，如不及時分析，應置於清潔、密閉的玻 璃容器，冰凍保存。 6.4 判定規則 按不同產品的要求所檢的漁藥殘留各指標均應符合本標準 的要求，各項指標中的極限值採⽤修約值比較法。超過 限量標準規定時，允許加倍抽樣將此項指標複驗⼀次， 按複驗結果判定本批產品是否合格。經複檢後所檢指標 仍不合格的產品則判為不合格品。 附 錄 A （規範性附錄） 氯黴素殘留的酶聯免疫測定法 A.1 適⽤範圍 本⽅法適⽤於測定⽔產品肌⾁組織中氯黴素的殘留量。 A.2 原理 利⽤抗體抗原反應。微孔板包被有針對兔免疫球蛋⽩ （IgG）（氯黴素抗體）的⽺抗體，加入氯黴素抗體、氯黴 素標記物、標準和樣品溶液。游離氯黴素與氯黴素酶標記 物競爭氯黴素抗體，同時氯黴素抗體與⽺抗體連接。沒有 連接的酶標記物在洗滌步驟中被洗去。將酶基質（過氧化 尿素）和發⾊劑（四甲基聯苯胺）加入到孔中並孵育；結 合的酶標記物將無⾊的發⾊劑轉化成藍⾊的產物。加入反 應停⽌液後使顏⾊由藍變為黃，在450 nm處測量，吸光度 與樣品的氯黴素濃度成反比。 29/10/2018 無公害食品 水產品中漁業殘留限量 http://aquamed.nvri.gov.tw/Module/PrintFriendly/Print.aspx?pid=gALRMsP%2bcy0%3d 6/10 A.3 檢測限 篩選⽅法的檢測下限為1μg/kg。 A.4 儀器 A.4.1 離⼼機。 A.4.2 微孔酶標儀（450 nm）。 A.4.3 旋轉蒸發儀。 A.4.4 混合器。 A.4.5 移液器。 A.4.6 50 L，100 L，450 L微量加液器等。 A.5 藥品和試劑 除非另有說明，在分析中僅使⽤確認為分析純的試劑和蒸 餾⽔或去離⼦⽔或相當純度的⽔。 A.5.1 ⼄酸⼄酯。 A.5.2 ⼄腈。 A.5.3 正⼰烷。 A.5.4 磷酸鹽緩衝液（PBS）（pH7.2）：0.55 g磷酸⼆氫鈉 （NaH2PO4·H2O），2.85 g磷酸氫⼆鈉（Na2HPO4·2H2O）， 9 g氯化鈉（NaCl）加入蒸餾⽔⾄1 000 mL。 A.6 標準溶液 分別取標準濃縮液50 L⽤450 L緩衝液1（試劑盒提供） 稀釋並混均勻，製成0、50 ng/L、50 ng/L、450 ng/L、1 350 ng/L、4 050 ng/L的標準溶液。 A.7 樣品提取和純化 A.7.1 取5.0 g粉碎的⿂⾁樣品（樣品先去脂肪組織），與20 mL⼄腈⽔溶液（86+16）混合10 min,15℃離⼼10 min（4 000r/min）。 A.7.2 取3 mL上清液與3 mL蒸餾⽔混合，加入4.5 mL⼄酸⼄ 酯混合10 min，15℃離⼼10 min（4 000r/min）。 A.7.3 將⼄酸⼄酯層轉移⾄另⼀瓶中繼續乾燥，⽤1.5 mL緩衝 液1溶液乾燥的殘留物，加入1.5 mL正⼰烷混合。 29/10/2018 無公害食品 水產品中漁業殘留限量 http://aquamed.nvri.gov.tw/Module/PrintFriendly/Print.aspx?pid=gALRMsP%2bcy0%3d 7/10 A.7.4 完全除去正⼰烷層（上層），取50μL⽔箱進⾏分析。 A.8 樣品測定程式 A.8.1 將⾜夠標準和樣品所⽤數量的孔條插入微孔架，記錄下 標準和樣品的位置，每⼀樣品和標準做兩個平⾏實 驗。 A.8.2 加入50μL稀釋了的酶標記物到微孔底部，再加入50μL 的標準或處理好的樣品液到各⾃的微孔中。 A.8.3 加入50μL稀釋了的抗體溶液到每⼀個微孔底部充分混 合，在室溫孵育2 h。 A.8.4 倒出孔中的液體，將微孔架倒置在吸⽔紙上拍打（每⾏ 拍打3次）以保證完全除去孔中的液體，然後⽤250μL 蒸餾⽔充入孔中，再次倒掉微孔中的液體，再重複操 作兩次。 A.8.5 加入50μL基質、50μL發⾊試劑到微孔中，充分混合並 在室溫、暗處孵育30 min。 A.8.6 加入100μL反應停⽌液到微孔中，混合好，以空氣為空 ⽩，在450 nm處測量吸光度值（注意：必須在加入反 應停⽌液後60 min內讀取吸光度值）。 A.9 結果 所獲得的標準和樣品吸光度值的平均值除以第⼀個標準 （0標準）的吸光度值再乘以100，得到以百分比給出的吸 光度值，以式（A.1）表⽰： ·························· （A.1） 式中： E——吸光度值，%； A——標準或樣品的吸光度值； A0——0標準的吸光度值。 以計算的標準值繪成⼀個對應氯黴素濃度（ng/L）的半對 數坐標系統曲線圖，校正的曲線在50 ng/L～1 350 ng/L的範 圍內應成為線性，相對應的每⼀個樣品的濃度，可以從曲 線上讀出。乘出稀釋倍數即可得到樣品中氯黴素的實際濃 度（ng/kg）。 29/10/2018 無公害食品 水產品中漁業殘留限量 http://aquamed.nvri.gov.tw/Module/PrintFriendly/Print.aspx?pid=gALRMsP%2bcy0%3d 8/10 附 錄 B （規範性附錄） ⼰烯雌酚（DES）殘留的酶聯免疫測定法 B.1 適⽤範圍 本⽅法適⽤於測定⽔產品肌⾁等可食組織中⼰烯雌酚的殘留 量。 B.2 原理 測定的基礎是利⽤抗體抗原反應。微孔板包被有針對兔 IgG（DES抗體）的⽺抗體，加入DES抗、標準和樣品溶 液。DES與DES抗體連接，同時DES抗體與⽺抗體連接。 洗滌步驟後，加入DES酶標記物，DES酶標記物與孔中未 結合的DES抗體結合，然後在洗滌步驟中除去未結合的 DES酶標記物。將酶基質和發⾊劑（四甲基聯苯胺）加入 到孔中並孵育；結合的酶標記物將無⾊的發⾊劑轉化為藍 ⾊的產物。加入反應停⽌液後使顏⾊由藍變為黃，在450 nm處沒量，吸光度與樣品的⼰烯雌酚濃度成反比。 B.3 檢測限 ⼰烯雌酚檢測的下限為1μg/kg。 B.4 儀器 B.4.1 微孔酶標儀（450 nm）。 B.4.2 離⼼機。 B.4.3 37℃恒溫箱。 B.4.4 移液器。 B.4.5 50μL，100μL，450μL微量加液器。 B.4.6 RIDA C18柱等。 B.5 試劑和標準溶液 除非另有說明，在分析中僅使⽤確認為分析純的試劑和蒸 餾⽔或去離⼦⽔或相當純度的⽔。 B.5.1 叔丁基甲基醚。 B.5.2 ⽯油醚。 B.5.3 ⼆氯甲烷。 B.5.4 6 mol/L磷酸。 29/10/2018 無公害食品 水產品中漁業殘留限量 http://aquamed.nvri.gov.tw/Module/PrintFriendly/Print.aspx?pid=gALRMsP%2bcy0%3d 9/10 B.5.5 ⼄酸鈉緩衝液等。 B.5.6 提供的DES標準液為直接使⽤液，濃度為0、12.5×10– 9mol/L、25×10–9mol/L、50×10–9mol/L、100×10– 9mol/L、200×10–9mol/L。 B.6 樣品處理 B.6.1 取5.0 g肌⾁（除去脂肪組織），⽤10 mL pH為7.2的67 m mol/L磷酸緩衝液研磨後，⽤8 mL叔丁基甲基醚提取 研磨物，強烈振盪20 min；離⼼10 min（4 000 r/min）；移去上清液，⽤8 mL叔丁基甲基醚重複提取 沉澱物。 B.6.2 將兩次提取的醚相合併，並且蒸發；⽤1 mL甲醇 （70%）溶解乾燥的殘留物；⽤3 mL⽯油醚洗滌甲醇 溶液（研磨15 s，短時間離⼼，吸除⽯油醚）。 B.6.3 蒸發甲醇溶液，⽤1 mL⼆氯甲烷溶解後，再⽤3 mL 1 mol/L的氫氧化鈉（NaOH）溶液提取；然後300 μL 6 mol/L磷酸中和提取液，⽤RIDA C18柱進⾏純化。 B.7 測定程式（室溫20℃～24℃條件下操作） B.7.1 將⾜夠標準和樣品所⽤數量的孔條插入微孔架，標準和 樣品做兩個平⾏實驗，記錄下標準和樣品的位置。 B.7.2 加入20μL的標準和處理好的樣品到各⾃的微孔中，標 準和樣品做兩個平⾏實驗。 B.7.3 加入50μL稀釋後的DES抗體到每⼀個微孔中，充分混合 並在2℃～8℃孵育過夜（注意：在第⼆早上繼續進⾏ 實驗之前，微孔板應在室溫下放置30 min以上，稀釋 ⽤緩衝液也應回到室溫，因此最好將緩衝液放在室溫 下過夜）。 B.7.4 倒出孔中的液體，將微孔架倒置在吸⽔紙上拍打（每⾏ 拍打3次）以保證完全除去孔中的液體，⽤250μL蒸餾 ⽔充入孔中，再次倒掉微孔中液體，再重複操作兩 次。 29/10/2018 無公害食品 水產品中漁業殘留限量 http://aquamed.nvri.gov.tw/Module/PrintFriendly/Print.aspx?pid=gALRMsP%2bcy0%3d 10/10 B.7.5 加入5μL稀釋的酶標記物到微孔底部，室溫孵育1 h。 B.7.6 倒出孔中的液體，將微孔架倒置在吸⽔紙上拍打（每次 拍打3次）以保證完全除去孔中的液體，⽤250μL蒸餾 ⽔充入孔中，再次倒掉微孔中液體，再重複操作⼀ 次。 B.7.7 加入50μL基質和50μL發⾊試劑到微孔中，充分混合並 在室溫暗處孵育15 min。 B.7.8 加入100μL反應停⽌液到微孔中，混合好在450 nm處測 量吸光度值（可選擇＞600nm的參比濾光片），以空 氣為空⽩，必須在加入停⽌液後60 min內讀取吸光度 值。 B.8 結果 所獲得的標準和樣品吸光度值的平均值除以第⼀個標準 （0標準）的吸光度值再乘以100，得到以百分比給出的吸 光度值，以式（B.1）表⽰： ·························· （B.1） 式中： E——吸光度值，%； A——標準或樣品的吸光度值； A0——0標準的吸光度值。 以計算的標準值繪成⼀個對應DES濃度（ng/L）的半對數坐標 系統曲線圖，校正的曲線在25 ng/L～200 ng/L的範圍內應成為 線性，相對應的每⼀個樣品的濃度，可以從曲線上讀出。乘 以稀釋倍數即可得到樣品中DES的實際濃度（ng/kg）。 ⾏政院農業委員會家畜衛⽣試驗所版權所有©2006 AHRI All Rights Reserved http://www.nvri.gov.tw/