National Standard GOSTR 54014-2010 Functional food. Determination of soluble and insoluble dietary fibres by en2ymabc-gravimetnc method

ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНТСТВО ПО ТЕХНИЧЕСКОМУ РЕГУЛИРОВАНИЮ И МЕТРОЛОГИИ Н А Ц И О Н А Л Ь Н Ы М С Т А Н Д А Р Т Р О С С И Й С К О Й Ф Е Д Е Р А Ц И И ГО С ТР 5 4 0 1 4 2010 ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ Определение растворимых и нерастворимых пищевых волокон ферментативно-гравиметрическим методом Издание официальное Москва Стандартинформ 2011 вязаное болеро http://www.kruzhevo-len.ru/vyazanye-kardigany-kruzhevnye-bluzki.html ГОСТ Р 54014—2010 Предисловие Цели и принципы стандартизации в Российской Федерации установлены Федеральным законом от 27 декабря 2002 г. № 184-ФЗ «О техническом регулировании», а правила применения национальных стандартов Российской Федерации — ГОСТ Р 1.0—2004 «Стандартизация в Российской Федерации. Основные положения» Сведения о стандарте 1 РАЗРАБОТАН Государственным образовательным учреждением высшего профессионального образования «Московский государственный университет пищевых производств» Министерства образо­ вания и науки Российской Федерации (ГОУ ВПО «МГУПП») 2 ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 036 «Функциональные пищевые про­ дукты» 3 УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 30 ноября 2010 г. № 624-ст 4 В настоящем стандарте учтены основные положения следующих международных (региональ­ ных) стандартов и сводов правил: CODEX STAN 234— 1999 (с учетом изменений 2007 г.) Комиссии Codex Alimentarius; CAC/MISC 6—2008 Комиссии CodexAlimentarius; CAC/GL 10— 1979 (с учетом изменений 1983,1991 и 2008 гг.) 5 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодно издаваемом информационном указателе «Национальные стандарты», а текст изменений и поправок — в ежеме­ сячно издаваемых информационных указателях «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячно издаваемом информационном указателе «Национальные стандарты». Соответству­ ющая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет ©Стандартинформ, 2011 Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и рас­ пространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническо­ му регулированию и метрологии ГОСТ Р 54014—2010 Содержание 1 Область применения......................................................................................................................................... 1 2 Нормативные ссы л ки ...................................................................................................................................... 1 3 Термины и определения.................................................................................................................................2 4 Сущность метода.............................................................................................................................................. 2 5 Реактивы, стандартные вещества и растворы...............................................................................................2 6 Средства измерений и оборудование........................................................................................................... 3 7 Отбор и подготовка п р о б .................................................................................................................................3 8 Подготовка к испытанию.................................................................................................................................3 9 Проведение испытания................................................................................................................................... 3 10 Обработка результатов.................................................................................................................................4 11 Метрологические характеристики метода................................................................................................... 5 12 Требования безопасности.............................................................................................................................. 5 13 Условия проведения испытания................................................................................................................... 5 Библиография.................................................................................................................................................... 6 III ГОСТ Р 54014— 2010 Н А Ц И О Н А Л Ь Н Ы Й С Т А Н Д А Р Т Р О С С И Й С К О Й Ф Е Д Е Р А Ц И И ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ Определение растворимых и нерастворимых пищевых волокон ферментативно-гравиметрическим методом Functional food. Determination of soluble and insoluble dietary fibres by enzymatic-gravimetric method Дата введения — 2012—01—01 1 Область применения Настоящий стандарт распространяется на функциональные пищевые продукты и устанавливает метод определения общей массовой доли растворимых и нерастворимых пищевых волокон, в т. ч. геми­ целлюлоз, целлюлозы, пектинов, резистентных крахмалов, лигнина и др. Диапазон измерения массовой доли пищевых волокон от 1 % до 30 % массы обезжиренного вещества. 2 Нормативные ссылки В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты: ГОСТ Р 8.563—96 Государственная система обеспечения единства измерений. Методики выполнения измерений ГОСТ Р ИСО/МЭК 17025—2006 Общие требования к компетентности испытательных и калиб­ ровочных лабораторий ГОСТ Р ИСО 5725-6—2002 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике ГОСТ Р 51418—99 Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Методы определения массовой доли золы, нерастворимой в соляной кислоте ГОСТ Р 52349—2005 Продукты пищевые. Продукты пищевые функциональные. Термины и определения ГОСТ Р 53228—2008 Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и техничес­ кие требования. Испытания ГОСТ Р 51418—99 Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Методы определения массовой доли золы, нерастворимой в соляной кислоте ГОСТ 12.1.005—88 Система стандартов безопасности труда. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны ГОСТ 12.1.007—76 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классифика­ ция и общие требования безопасности ГОСТ 12.1.018—93 Система стандартов безопасности труда. Пожаровзрывобезопасность ста­ тического электричества. Общие требования ГОСТ 12.1.019—79 Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие тре­ бования и номенклатура видов защиты ГОСТ 200—76 Реактивы. Натрий фосфорнокислый 1-водный. Технические условия ГОСТ 245—76 Реактивы. Натрий фосфорнокислый однозамещенный 2-водный. Технические условия Издание официальное 1 ГОСТ Р 54014—2010 ГОСТ 1770— 74 (ИСО 1042— 83, ИСО 4788— 80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия ГОСТ 2603— 79 Реактивы. Ацетон. Технические условия ГОСТ 3118— 77 Реактивы. Кислота соляная. Технические условия ГОСТ 4328— 77 Реактивы. Натрия гидроокись. Технические условия ГОСТ 5901— 87 Изделия кондитерские. Методы определения массовой доли золы и металломаг­ нитной примеси ГОСТ 5962— 67 Спирт этиловый ректификованный. Технические условия ГОСТ 6552— 80 Реактивы. Кислота ортофосфорная. Технические условия ГОСТ 6709— 72 Вода дистиллированная. Технические условия ГОСТ 11773— 76 Реактивы. Натрий фосфорнокислый двузамещенный. Технические условия ГОСТ 12026— 76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия ГОСТ 15113.8— 77 Концентраты пищевые. Методы определения золы ГОСТ 25336— 82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры ГОСТ 25555.4— 91 Продукты переработки плодов и овощей. Методы определения золы и щелоч­ ности общей и водорастворимой золы ГОСТ 26313— 84 Продукты переработки плодов и овощей. Правила приемки, методы отбора проб ГОСТ 26671— 85 Продукты переработки плодов и овощей, консервы мясные и мясораститель­ ные. Подготовка проб для лабораторных анализов ГОСТ 26809— 86 Молоко и молочные продукты. Правила приемки, методы отбора и подготовка проб к анализу ГОСТ 26889— 86 Продукты пищевые и вкусовые. Общие указания по определению содержания азота методом Кьельдаля П р и м е ч а н и е — При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылоч­ ных стандартов в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодно издаваемому информа­ ционному указателю «Национальные стандарты», который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим ежемесячно издаваемым информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководство­ ваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку. 3 Термины и определения В настоящем стандарте применены термины по ГОСТ Р 52349. 4 Сущность метода Метод основан на ферментативном гидролизе крахмальных и некрахмальных соединений с помощью а-амилазы, протеазы и амилоглюкозидазы до моно-, ди-, олигосахаридов и пептидов. Пище­ вые волокна осаждают этиловым спиртом, высушивают и определяют гравиметрическим методом. Общую массовую долю пищевых волокон выражают в процентах (г/100 г). 5 Реактивы, стандартные вещества и растворы Все реактивы, используемые для анализа, должны быть квалификации чистые для анализа (ч. д. а.). Вода, используемая для приготовления растворов ферментов, должна быть бидистиллиро ванной. а-Амилаза1) термостабильная удельной активностью 10 ед./мг по [1]. Протеаза1) удельной активностью 7— 15 ед./мг по [1]. Амилоглюкозидаза1) удельной активностью 400 ед./мг по [1]. 1)' Допускается использование имеющихся в продаже готовых наборов реактивов (ферментов) для опреде­ ления общих пищевых волокон (например, фирмы MERCK — BioquantR Gesamtballastoffe 12979) при условии соот­ ветствия качества реагентов требованиям настоящего стандарта. Указанный пример реактивов является рекомен­ дуемым для применения. Эта информация приведена для сведения пользователей настоящего стандарта и не означает, что стандарт устанавливает обязательное применение данного набора реактивов. 2 ГОСТ Р 54014—2010 Эфир петролейный. Этиловый спирт 95 % об. по ГОСТ 5962. Этиловый спирт 78 % об.: смешать 207 см3 дистиллированной воды по ГОСТ6709 и 793 см3этанола 95% об. по ГОСТ 5962. Раствор фосфатного буфера 0,08 моль/дм3, pH 6,0: растворяют 1,4 г динатрийгидрофосфата (Na2HP04) по ГОСТ 245 или 1,752 г динатрий гидрофосфата дигидрата (Na2HP02 • 2Н20 ) по ГОСТ 200 и 9,68 г натрия дигидрофосфата моногидрата (NaH2P04 • Н20 ) по ГОСТ 11773 в 700 см3 воды, доводят pH до 6,0 с помощью гидроокиси натрия (NaOH) по ГОСТ 4328 или фосфорной кислоты (Н3Р04) по ГОСТ 6552, разбавляют водой по ГОСТ 6709 до 1000 см3. Раствор гидроокиси натрия (NaOH) 0,275 моль/дм3: разбавляют 275 см3 раствора гидроокиси натрия 1 моль/дм3 водой до 1000 см3. Раствор соляной кислоты (HCI) 0,325 моль/дм3: разбавляют 325 см3 концентрированной соляной кислоты 1 моль/дм3 дистиллированной водой до 1000 см3. Ацетон по ГОСТ2603. Вода дистиллированная по ГОСТ 6709. 6 Средства измерений и оборудование Весы лабораторные по ГОСТ Р 53228. Фильтры бумажные обеззоленные диаметром 15 см поГОСТ 12026. Шкаф сушильный, обеспечивающий температуру от 60 °Сдо110 °С. Эксикатор по ГОСТ 25336. Стаканы химические вместимостью 400 см3 по ГОСТ 25336. Баня водяная с терморегулятором для поддержания температуры (60 ± 5) °С, оборудованная качалкой или магнитной мешалкой. pH-метр с погрешностью измерения не более 0,1 ед. pH. Дозаторы пипеточные с объемом доз 0,05 и 0,5 см3. Цилиндры мерные вместимостью5 0 и 500см3поГОСТ 1770. Насос водоструйный стеклянный лабораторный по ГОСТ25336. Печь муфельная с терморегулятором для поддержания температуры (900 ± 5) °С. Фольга алюминиевая. Мельница лабораторная или ступка. Допускается использование других средств измерений с метрологическими характеристиками и лабораторного оборудования с техническими характеристиками, не уступающими перечисленным выше. 7 Отбор и подготовка проб Отбор и подготовка проб — по ГОСТ 26313,26671 и 26809. 8 Подготовка к испытанию При необходимости пробу измельчают в гомогенизаторе или лабораторной мельнице. Если содер­ жание жира в пробе превышает 5 %, его экстрагируют петролейным эфиром из расчета 25 см3 на 1 г про­ бы. Обезжиренный образец высушивают в сушильном шкафу в течение одного часа при температуре 70 °С и помещают в эксикатор. 9 Проведение испытания При проведении испытания избегают загрязнений, связанных с поглощением пробой дополни­ тельной влаги. 9.1 Берут две навески пробы массой 1 г (с точностью до 0,0001 г) в стеклянные стаканы вмести­ мостью 400 см3 и добавляют в каждый по 50 см3 фосфатного буфера pH 6,0. 9.2 Испытание 9.2.1 С помощью пипеточного дозатора в каждый стакан вносят по 0,05 см3 раствора термоста­ бильной а-амилазы по [1]. 3 ГОСТ Р 54014— 2010 Содержимое перемешивают, слегка вращая стаканы, после чего стаканы закрывают алюминиевой фольгой и помещают в кипящую водяную баню. Время выдержки 30 мин отсчитывают с момента, когда содержимое нагреется до температуры 90 °С. Затем смесь охлаждают до температуры 20 °С и доводят значение pH до 7,4— 7,6 раствором гидроокиси натрия молярной концентрации 0,275 моль/дм3. 9.2.2 В каждый стакан вносят 0,05 см3 раствора протеазы по [1] с помощью пипеточного дозатора. Содержимое стаканов перемешивают и закрывают алюминиевой фольгой, выдерживают на водяной бане при температуре 60 °С в течение 30 мин при постоянном перемешивании, охлаждают до 20 °С и доводят значение pH до 4,3— 4,7 с помощью раствора соляной кислоты 0,325 моль/дм3. 9.2.3 Затем в каждый стакан с помощью пипеточного дозатора вносят 0,150 см3 раствора амило глюкозидазы по [1], выдерживают на водяной бане при температуре 60 °С в течение 30 мин, отсчитывая время с момента, когда температура содержимого стаканов достигнет 60 °С. 9.2.4 Мерным цилиндром отмеряют 280 см3 этилового спирта 78 % об., подогревают его до темпе­ ратуры 60 °С, добавляют ксодержимому стаканов и выдерживают при комнатной температуре в течение 60 мин для формирования осадка. 9.2.5 Высушенные при температуре 60 °С до постоянной массы (разница между взвешиваниями не должна превышать 0,001 г) и взвешенные (с точностью до 0,0001 г) бумажные фильтры помещают в стеклянные воронки и смачивают этиловым спиртом 95 % об., осадок, содержащий пищевые волокна, фильтруют количественно, смывая со стенок стаканов порциями этилового спирта, затем осадок на фильтре промывают три раза порциями этилового спирта 78 % об. по 20 см3, два раза порциями этилово­ го спирта 95 % об. по 10 см3 и два раза порциями ацетона по 10 см3. 9.2.6 Осадки на фильтрах высушивают при температуре 105 °С в сушильном шкафу до постоян­ ной массы (разница между взвешиваниями не должна превышать 0,001 г). Фильтры охлаждают в эксика­ торе и взвешивают с точностью до 0,0001 г. 9.2.7 Водном из двух осадков определяют содержание азота методом Кьельдаля поГО СТ 26889. Полученное значение умножают на 6,25, получая содержание белка. Во втором осадке в зависимости от вида функционального пищевого продукта определяют содержание золы по ГОСТ 5901, ГОСТ 15113.8, ГОСТ 25555.4 или ГОСТ Р 51418. 9.3 Число параллельных определений Выполняют два независимых определения в двух различных пробах одного и того же образца. 10 Обработка результатов Общую массовую долю пищевых волокон X, %, от массы обезжиренного сухого вещества вычис­ ляют по формуле т 1 - \ h + wA-m2]X ю о ) X Щ где т л — масса навески сухой обезжиренной пробы, г; т2 — масса осадка, г; w-i — массовая доля белка в осадке, % (ГОСТ 26889), вычисляемая по формуле ч/л = ^ Ю 0 ; т2 w2 — массовая доля золы в осадке, % (ГОСТ 5901, ГОСТ 15113, ГО С Т25555.4 или ГО С ТР 51418), вычисляемая по формуле w2 = — • 100, т2 где т3 — масса белка, г (ГОСТ 26889); т4 — масса золы, г (ГОСТ 5901, ГОСТ 15113, ГОСТ 25555.4 или ГОСТ Р 51418). Результат приводят с точностью до 0,01 г пищевых волокон на 100 г обезжиренного сухого вещества. 4 ГОСТ Р 54014—2010 11 Метрологические характеристики метода 11.1 Повторяемость Абсолютное расхождение между результатами двух параллельных определений, выполненных для одной и той же пробы в одной лаборатории одним сотрудником, не должно превышать 10 % от их среднеарифметического значения (при Р= 0,95). 11.2 Воспроизводимость Абсолютное расхождение между результатами двух измерений, выполненных для одной и той же пробы в двух различных лабораториях, не должно превышать 0,1 г пищевых волокон на 100 г пробы (при Р= 0,95). 11.3 Контроль стабильности результатов измерений при реализации методики в лаборатории Контроль стабильности результатов измерений в лаборатории осуществляют в соответствии с требованиями ГОСТ Р ИСО 5725-6, используя метод контроля стабильности стандартного отклонения промежуточной прецизионности по ГОСТ Р ИСО 5725-6 (пункт 6.2.3) с применением контрольных карт Шухарта. Периодичность контроля и процедуры контроля стабильности результатов измерений должны быть предусмотрены в руководстве по качеству лаборатории в соответствии с ГОСТ Р ИСО/МЭК17025 (подраздел 4.2) и ГОСТ Р 8.563 (пункт 7.1.1). 12 Требования безопасности При проведении испытания следует соблюдать требования электробезопасности по ГОСТ 12.1.018, ГОСТ 12.1.019 и инструкции по эксплуатации лабораторного оборудования. При работе с чистыми веществами следует соблюдать требования безопасности, установленные для работы с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами поГОСТ 12.1.007. Контроль за содержанием вредных веществ в воздухе рабочей зоны следует проводить в соот­ ветствии с требованиями ГОСТ 12.1.005. 13 Условия проведения испытания При подготовке и проведении испытания должны быть соблюдены следующие условия: температура окружающей среды от 10 °С до 25 °С включительно; относительная влажность воздуха от 40 % до 70 % включительно. 5 ГОСТ Р 54014—2010 Библиография [1] Номенклатура ферментов. Рекомендации Международного биохимического союза по номенклатуре и класси­ фикации ферментов, а также единицам ферментов и символам кинетики ферментативных реакций. — М., 1979 6 ГОСТ Р 54014—2010 УДК 663/664.777:006.354 ОКС 67.040, Н59 ОКСТУ9ЮО 67.050 Ключевые слова: продукты пищевые функциональные, идентификация, растворимые и нерастворимые пищевые волокна, ферментативно-гравиметрический метод, общая массовая доля 7 Редактор Л.В. Коретникова Технический редактор В.Н. Прусакова Корректор М.В. Бучная Компьютерная верстка И.А. Налейкиной Сдано в набор 03.06.2011. Подписано в печать 26.07.2011. Формат 60 х 84%. Бумага офсетная. Гарнитура Ариал. Печать офсетная. Уел. печ. л. 1,40. Уч.-изд. л. 0,75. Тираж 211 экз. Зак. 676. ФГУП «СТАНДАРТИНФОРМ», 123995 Москва, Гранатный пер., 4. www.gostinfo.ru info@gostinfo.ru Набрано во ФГУП «СТАНДАРТИНФОРМ» на ПЭВМ. Отпечатано в филиале ФГУП «СТАНДАРТИНФОРМ» — тип. «Московский печатник», 105062 Москва, Лялин пер., 6. ГОСТ Р 54014-2010 http://www.mosexp.ru# http://www.mosexp.ru# http://files.stroyinf.ru/Index2/1/4293805/4293805188.htm