Regulation on materials and articles containing vinyl chloride monomer and intended for contact with food

Na osnovu ~lana 17. stav 2. i ~lana 72. Zakona o hrani ("Slu`beni glasnik BiH", broj 50/04) i ~lana 17. Zakona o Vije}u ministara Bosne i Hercegovine ("Slu`beni glasnik BiH", br. 30/03, 42/03, 81/06, 76/07, 81/07, 94/07 i 24/08), Vije}e ministara Bosne i Hercegovine, na prijedlog Agencije za Ponedjeljak, 24. 5. 2010. S LU @ B E N I G LAS N I K B i H Broj 42 - Stranica 273 Broj 42 - Stranica 274 S LU @ B E N I G LAS N I K B i H Ponedjeljak, 24. 5. 2010. sigurnost hrane Bosne i Hercegovine u saradnji s nadle`nim organima entiteta i Br~ko Distrikta Bosne i Hercegovine, na 113. sjednici, odr`anoj 21. januara 2010. godine, donijelo je PRAVILNIK O MATERIJALIMA I PREDMETIMA KOJI SADR@E VINIL HLORID MONOMER I NAMIJENJENI SU ZA KONTAKT S HRANOM DIO PRVI - OP]E ODREDBE ^lan 1. (Predmet) Pravilnik o materijalima i predmetima koji sadr`e vinil hlorid monomer i namijenjeni su za kontakt s hranom (u daljnjem tekstu: Pravilnik) regulira prisustvo vinil hlorid monomera unutar, i mogu}u migraciju iz, materijala i predmeta koji su pripremljeni od vinil hlorid polimera ili kopolimera (u daljnjem tekstu: materijali i predmeti), a koji su u svom krajnjem stanju namijenjeni da do|u u kontakt s hranom, ili koji su u kontaktu s hranom i namijenjeni su za tu svrhu. ^lan 2. (Op}i uslovi) (1) Materijali i predmeti ne smiju sadr`avati koli~inu vinil hlorid monomera koja prelazi nivo koji je utvr|en u Aneksu I. koji je sastavni dio ovog pravilnika. (2) Materijali i predmeti ne smiju na hranu koja je u kontaktu ili je dovedena u kontakt s tim materijalima i predmetima prenijeti vinil hlorid koji je mogu}e detektirati metodom koja je u skladu s kriterijima utvr|enim u Aneksu II. koji je sastavni dio ovog pravilnika. ^lan 3. (Metode analize) (1) Analiza neophodna za slu`benu kontrolu nivoa vinil hlorid monomera u materijalima i predmetima namijenjenim za kontakt s hranom, koji se navode kao materijali i predmeti u Aneksu III. koji je sastavni dio ovog pravilnika, vr{i se u skladu s metodom koja je opisana u Aneksu III. (2) Analiza neophodna za slu`benu kontrolu nivoa vinil hlorida koji ispu{taju materijali i predmeti u hranu vr{i se u skladu s metodom opisanom u Aneksu IV. koji je sastavni dio ovog pravilnika. DIO DRUGI - PRIJELAZNE I ZAVR[NE ODREDBE ^lan 4. (Slu`bene kontrole) Slu`bene kontrole i inspekcijski nadzor nad primjenom ovog pravilnika provodit }e se na na~in kako je to propisano va`e}im propisima. ^lan 5. (Stupanje na snagu) Ovaj pravilnik stupa na snagu osmog dana od dana objavljivanja u "Slu`benom glasniku BiH". VM broj 115/10 21. januara 2010. godine Sarajevo Predsjedavaju}i Vije}a ministara BiH Dr. Nikola [piri}, s. r. ANEKS I. MAKSIMALNI NIVO VINIL HLORID MONOMERA U MATERIJALIMA I PREDMETIMA Jedan miligram po kilogramu u krajnjem proizvodu. ANEKS II. KRITERIJI KOJI SE PRIMJENJUJU NA METODU ODRE\IVANJA NIVOA VINIL HLORIDA U MATERIJALIMA I PREDMETIMA I ODRE\IVANJA VINIL HLORIDA KOJI OSLOBODE MATERIJALI I PREDMETI (1) Nivo vinil hlorida u materijalima i predmetima i nivo vinil hlorida koji oslobode materijali i predmeti u hranu odre|uje se hromatografijom u plinskoj fazi koriste}i "headspace" metodu. (2) S ciljem odre|ivanja vinil hlorida koji oslobode materijali i predmeti u hranu, postavlja se detekcijski limit od 0,01 mg/kg. (3) Vinil hlorid koji oslobode materijali i predmeti u hranu u principu se odre|uje u hrani. Kada se poka`e da je odre|ivanje u odre|enoj hrani nemogu}e iz tehni~kih razloga, mo`e se odobriti odre|ivanje sa simulantima za tu specifi~nu hranu. ANEKS III. ODRE\IVANJE NIVOA VINIL HLORID MONOMERA U MATERIJALIMA I PREDMETIMA POGLAVLJE I. OBIM I POLJE PRIMJENE Ova metoda odre|uje nivo vinil hlorid monomera u materijalima i predmetima. POGLAVLJE II. PRINCIP Nivo vinil hlorid monomera (VC) u materijalima ili predmetima odre|uje se putem plinske hromatografije koriste}i "headspace" metodu nakon rastvaranja ili suspenzije uzorka u N,N-dimetilacetamidu. POGLAVLJE III. REAGENSI (1) Vinil hlorid (VC), ~isto}e ve}e od 99,5 % (v/v). (2) N,N-dimetilacetamid (DMA), bez ikakvog one~i{}enja koje ima isto vrijeme retencije kao VC ili kao interni standard (stav (3) ovog poglavlja) u uslovima u kojima se vr{i test. (3) Dietil eter ili cis-2-buten, u DMA (stav (2) ovog poglavlja) kao rastvor internog standarda.Ovi interni standardi ne smiju sadr`avati bilo kakvo one~i{}enje koje ima isto vrijeme retencije kao VC, u uslovima u kojima se vr{i test. POGLAVLJE IV. OPREMA Napomena Instrument ili dio opreme spominje se samo ako je on poseban ili ako je pravljen po posebnim specifikacijama. Uobi~ajena laboratorijska oprema smatra se dostupnom. (1) Plinski hromatogram opremljen s automatskim "head-spac" uzima~em uzorka ili s opremom za manualno ubrizgavanje uzorka. (2) Detektor jonizacije plamenom ili drugi detektori koji se pominju u Poglavlju VII. ovog aneksa. (3) Kolona plinske hromatografije. Kolona mora dozvoljavati razdvajanje vrhova u zraku, VC i internog standarda, ako se on koristi. Nadalje, kombinirani sistem iz st. (2) i (3) ovog poglavlja mora omogu}iti da je signal koji se dobije od rastvora koji sadr`i 0,02 mg VC/litru DMA ili 0,02 mg VC/kg DMA najmanje pet puta ve}i od pozadinskog {uma. (4) Cjev~ice ili bo~ice za uzorke opremljene sa silikonskim ili butil gumenim septumima. Kad se koriste manualne tehnike uzorkovanja, uzimanje uzorka {pricom iz "headspace" prostora mo`e uzrokovati formiranje djelimi~nog vakuuma unutar cjev~ice ili bo~ice. Dakle, za manualne tehnike gdje cjev~ice nisu pod pritiskom prije uzimanja uzorka, preporu~uje se upotreba ve}ih cjev~ica. (5) Mikro-{price. (6) Hermeti~ke {price za "headspace" manualno uzimanje uzorka. (7) Analiti~ka vaga s ta~no{}u do 0,1 mg. POGLAVLJE V. PROCEDURA UPOZORENJE: VC je opasna supstanca i nalazi se kao plin pri sobnoj temperaturi, tako da bi rastvor trebalo da bude pripremljen u dobro ventiliranom digestoru. Napomena – Potrebno je preduzeti svu neophodnu pa`nju kako bi se osiguralo da ne do|e do gubitka VC ili DMA; – Kada se koriste manuelne tehnike uzimanja uzorka potrebno je koristiti interni standard iz Poglavlja III. stav (3) ovog aneksa; – Kada se koristi interni standard, mora se koristiti jedan isti rastvor tokom ~itave procedure. (1) Priprema koncentriranog standardnog rastvora VC od pribli`no 2 000 mg/kg S ta~no{}u do najbli`eg 0,1 mg, izvagati odgovaraju}u staklenu posudu i u nju staviti odre|enu koli~inu (npr 50 ml) DMA (Poglavlje III. stav (2) ovog aneksa). Ponovo izvagati. U DMA dodati odre|enu koli~inu (npr. 0,1 g) VC (Poglavlje III. stav (1) ovog aneksa) u te~nom ili plinskom stanju, polagano ubrizgavaju}i ga u DMA. VC se tako|er mo`e dodati upuhivaju}i ga na DMA, pod uslovom da se koristi ure|aj koji }e sprije~iti gubitak DMA. Ponovo izvagati do najbli`eg 0,1 mg. Ostaviti dva sata kako bi se omogu}ilo da se postigne ekvilibrij. Standardni rastvor ~uvati u fri`ideru. (2) Priprema razbla`enog standardnog rastvora VC Uzeti izvaganu koli~inu koncentriranog standardnog rastvora VC (stav (1) ovog poglavlja) i razbla`iti ga, do poznate zapremine ili poznate te`ine, sa DMA (Poglavlje III. stav (2) ovog aneksa) ili s rastvorom internog standarda (Poglavlje III. stav (3) ovog aneksa). Koncentracija rezultiraju}eg razbla`enog standardnog rastvora izra`ava se u mg/l odnosno mg/kg. (3) Priprema kalibracione krive Napomena – Kriva mora sadr`avati najmanje sedam pari ta~aka, – ponovljivost o~itavanja (1 ) mora biti ni`a od 0,02 mg VC/l ili kg DMA, – kriva mora biti izra~unata na osnovu ovih ta~aka tehnikom najmanjih kvadrata, tj. linija regresije mora biti izra~unata koriste}i sljede}u jedna~inu: y a x a� 1 0 gdje je: � � � � � � a n xy x y n x x 1 2 2 � � � �� �� i: � � � � � � � � � � a y x x xy n x x 0 2 2 2 � � � � � � � �� gdje je y= visina ili povr{ina najvi{ih ta~aka u bilo kojem jedinstvenom odre|ivanju, x = odgovaraju}a koncentracija linije regresije, n = broj provedenih odre|ivanja (n�14), kriva mora biti linearna, tj. standardna devijacija (s) razlika izme|u izmjerenih o~itavanja (y 1 ) i odgovaraju}ih vrijednosti o~itavanja koje su izra~unate s linije regresije (z 1 ) podijeljeno sa srednjom vrijedno{}u (y) svih izmjerenih o~itavanja ne smije prelaziti 0,07: To se ra~una pomo}u: s y � 0 07, gdje je: � � s y z n i i i n � � � 2 1 1 i: y n y i n � � � 1 1 1 yi = svako pojedina~no izmjereno o~itavanje, zi = odgovaraju}a vrijednost o~itavanja (yi) na izra~unatoj liniji regresije, n�14 Pripremiti dvije serije od najmanje sedam cjev~ica (Poglavlje IV. stav (4) ovog aneksa). U svaku cjev~icu dodati zapreminu razbla`enog standardnog rastvora VC (Poglavlje V. stav (2) ovog aneksa) i DMA (Poglavlje III. stav (2) ovog aneksa) ili rastvora internog standarda u DMA (Poglavlje III. stav (3) ovog aneksa) tako da kona~na koncentracija VC rastvora duplikata bude pribli`no jednaka 0; 0,050; 0,075; 0,100; 0,125; 0,150; 0,200, itd. mg/l ili mg/kg DMA i da sve cjev~ice sadr`e istu koli~inu DMA koja }e se koristiti prema stavu (5) ovog poglavlja. Za~epiti cjev~ice i nastaviti kako je opisano u stavu (6) ovog poglavlja. Konstruirati grafikon na kojem vrijednosti ordinate pokazuju povr{inu (ili visinu) najvi{ih ta~aka VC rastvora duplikata ili odnos ovih povr{ina (ili visina) s relevantnim najvi{im ta~kama internog standarda a vrijednosti abscise pokazuju koncentracije VC rastvora duplikata. (4) Validacija pripreme standardnih rastvora dobivenih u st. (1) i (2) ovog poglavlja. Ponoviti proceduru opisanu u st. (1) i (2) ovog poglavlja da bi se dobio drugi standardni rastvor koncentracije jednak 0,1 mg VC/l ili 0,1 mg/kg DMA ili internog rastvora. Prosjek dva odre|ivanja plinskom hromatografijom ovog rastvora ne smije se razlikovati vi{e od 5 % u odnosu na odgovaraju}u ta~ku na kalibracionoj krivoj. Ako je razlika ve}a od 5 %, odbijaju se svi rastvori dobiveni u st. (1), (2), (3) i (4) ovog poglavlja i ponoviti proceduru od po~etka. (5) Priprema uzoraka materijala ili predmeta Pripremiti dvije cjev~ice (Poglavlje IV. stav (4) ovog aneksa). U svaku cjev~icu odmjeriti najmanje 200 mg, do najbli`eg 0,1 mg, uzorka dobivenog iz jednog materijala ili predmeta koji se ispituje i koji je usitnjen na male djeli}e. Poku{ati osigurati da se u svaku cjev~icu izvaga jednaka koli~ina. Odmah zatvoriti cjev~ice. Za svaki gram uzorka u svaku cjev~icu dodati 10 ml ili 10 g DMA (Poglavlje III. stav (2) ovog aneksa) ili 10 ml ili 10 g rastvora internog standarda (Poglavlje III. stav (3) ovog aneksa). Hermeti~ki zatvoriti bo~ice i nastaviti kako je opisano u stavu (6) ovog poglavlja. (6) Odre|ivanja plinskom hromatografijom a) Prodrmati cjev~ice izbjegavaju}i kontakt izme|u sadr`ane te~nosti i septuma (Poglavlje IV. stav (4) ovog aneksa) kako bi se dobilo {to je mogu}e homogeniziraniji rastvor ili suspenzija uzoraka materijala ili predmeta (stav (5) ovog poglavlja). b) Staviti sve zatvorene cjev~ice (st. (3), (4) i (5) ovog poglavlja) u vodenu kupku na dva sata na 60 ± 1 °C kako bi se omogu}ilo da se dostigne ekvilibrij. Ponovo prodrmati, po potrebi. c) Uzeti uzorak iz "headspace" prostora u cjev~ici. Kada se koriste manualne tehnike uzimanja uzorka, mora se obratiti pa`nja da se dobije reproduktivan uzorak (vidjeti Poglavlje IV. stav (4) ovog aneksa), posebno {prica se mora prethodno zagrijati do temperature uzorka. Izmjeriti povr{inu (ili visinu) vrhova koji se odnose na VC i na interni standard ako je bio kori{ten. d) Odstraniti s kolone (Poglavlje IV. stav (3) ovog aneksa) vi{ak DMA odgovaraju}om metodom ~im se vrhovi koji proizilaze od DMA poka`u na hromatogramu. POGLAVLJE VI. IZRA^UNAVANJE REZULTATA (1) Pomo}u interpolacije na krivoj prona}i nepoznatu koncentraciju i jednog i drugog rastvora uzorka uzimaju}i u obzir rastvor internog standarda ako je bio kori{ten. Ponedjeljak, 24. 5. 2010. S LU @ B E N I G LAS N I K B i H Broj 42 - Stranica 275 1 Vidi preporuke u ISO DIS 5725:1977 Broj 42 - Stranica 276 S LU @ B E N I G LAS N I K B i H Ponedjeljak, 24. 5. 2010. Izra~unati koli~inu VC u oba uzorka materijala ili predmeta koji se testira pomo}u sljede}e formule: x C V M � � 1000 gdje je: X=koncentracija VC u uzorku materijala ili predmeta izra`ena u mg/kg. C= koncentracija VC u cjev~ici koja sadr`i uzorak materijala ili predmeta (vidi Poglavlje V stav (5) ovog Aneksa) izra`ena u mg/l ili mg/kg. V=zapremina ili masa DMA u cjev~ici koja sadr`i uzorak materijala ili predmeta (vidi Poglavlje V stav (5) ovog Aneksa) izra`ena u litrima ili kg. M=koli~ina uzorka materijala ili predmeta, izra`ena u gramima. (2) Koncentracija VC u materijalu i predmetu koji se ispituje izra`ena u mg/kg je srednja vrijednost dvije koncentracije VC (mg/kg) odre|ene u stavu (1) ovog poglavlja pod uslovom da je ispunjen kriterij ponovljivosti iz Poglavlja VIII. POGLAVLJE VII. POTVRDA NIVOA VC U slu~ajevima kada sadr`aj VC u materijalima i predmetima koji je izra~unat na osnovu Poglavlja VI. stav (2) ovog aneksa prelazi maksimalnu dozvoljenu koli~inu, rezultati koji su dobiveni analizom oba uzorka (Poglavlje V. stav (6) i Poglavlje VI. stav (1) ovog aneksa) moraju biti potvr|eni na jedan od tri na~ina: – koriste}i najmanje jo{ jednu kolonu (Poglavlje IV. stav (3) ovog aneksa) sa stacionarnom fazom koja ima druga~iju polarnost. Ovu proceduru treba nastaviti dok se ne dobije hromatogram bez dokaza o preklapanju vrhova VC i/ili internog standarda sa sastojcima uzorka materijala ili predmeta, – koriste}i druge detektore, npr. mikroelektrolitski detektor konduktivnosti, – koriste}i masenu spektrometriju. U ovom slu~aju, ako su molekularni joni sa izvornim masama (m/e) od 62 i 64 prisutni u odnosu 3:1, mo`e se, s visokom vjerovatno}om, smatrati kao potvrda prisustva VC. U slu~aju dileme, potrebno je provjeriti ~itav maseni spektar. POGLAVLJE VIII. PONOVLJIVOST Razlika izme|u rezultata dva odre|ivanja (Poglavlje VI. stav (1) ovog aneksa) koja su izvr{ena simultano ili brzo jedan za drugim na istom uzorku, od istog analiti~ara, pod istim uslovima, ne smije prelaziti 0,2 mg VC/kg materijala ili predmeta. ANEKS IV. ODRE\IVANJE VINIL HLORIDA KOJI ISPU[TAJU MATERIJALI I PREDMETI U HRANU POGLAVLJE I. OBIM I POLJE PRIMJENE Ova metoda odre|uje nivo vinil hlorida u hrani. POGLAVLJE II. PRINCIP Nivo vinil hlorida (VC) u hrani odre|uje se putem plinske hromatografije koriste}i 'headspace' metodu. POGLAVLJE III. REAGENSI (1) Vinil hlorid (VC), ~isto}e ve}e od 99,5% (v/v). (2) N,N-dimetilacetamid (DMA), bez ikakvog one~i{}enja koja imaju isto vrijeme retencije kao VC ili kao interni standard (stav (3) ovog poglavlja) u uslovima u kojima se vr{i test. (3) Dietil eter ili cis-2-buten, u DMA (stav (2) ovog poglavlja) kao rastvor internog standarda. Ovi interni standardi ne smiju sadr`avati bilo kakvo one~i{}enje koje ima isto vrijeme retencije kao VC, u uslovima u kojima se vr{i test. (4) Destilirana voda ili demineralizirana voda ekvivalentne ~isto}e. POGLAVLJE IV. OPREMA Napomena: Instrument ili dio opreme spominje se samo ako je on poseban ili ako je pravljen po posebnim specifikacijama. Uobi~ajena laboratorijska oprema smatra se dostupnom. (1) Plinski hromatograf opremljen automatskim "head-space" uzima~em uzorka ili opremom za manualno ubrizgavanje uzorka. (2) Detektor jonizacije s plamenom ili drugi detektori koji se pominju u Poglavlju VII. (3) Kolona plinske hromatografije. Kolona mora dozvoljavati razdvajanje vrhova zraka, VC i internog standarda, ako se koristi. Nadalje, kombinirani sistem iz st. (2) i (3) ovog poglavlja mora omogu}iti da je signal koji se dobije od rastvora koji sadr`i 0,005 mg VC/litru DMA ili 0,005 mg VC/kg DMA jednak najmanje petostrukoj vrijednosti pozadinskog {uma. (4) Cjev~ice ili bo~ice za uzorke opremljene sa silikonskim ili butil gumenim septumima. Kad se koriste manualne tehnike uzorkovanja uzimanje uzorka {pricom iz "headspace" prostora mo`e uzrokovati formiranje djelimi~nog vakuuma unutar cjev~ice ili bo~ice. Dakle, za manualne tehnike gdje cjev~ice nisu pod pritiskom prije uzimanja uzorka, preporu~uje se upotreba ve}ih cjev~ica. (5) Mikro{price. (6) Hermeti~ke {price za "headspace" manuelno uzimanje uzorka. (7) Analiti~ka vaga s ta~no{}u do O,1mg. POGLAVLJE V. PROCEDURA UPOZORENJE: VC je opasna supstanca i nalazi se kao plin pri normalnoj temperaturi, tako da bi se priprema rastvora trebala vr{iti u dobro ventiliranom digestoru. Napomena: Potrebno je preduzeti sve neophodne mjere kako bi se osiguralo da ne do|e do gubitka nimalo VC ili DMA. Kada se koriste manualne tehnike uzimanja uzorka potrebno je koristiti interni standard (Poglavlje III stav (3) ovog aneksa). Kada se koristi interni standard, mora se koristiti isti rastvor tokom ~itave procedure. (1) Priprema standardnog rastvora VC (rastvor A) a) Koncentrirani standardni rastvor VC od pribli`no 2 000 mg/kg S ta~no{}u do najbli`e 0,1 mg, izvagati odgovaraju}u staklenu posudu i u nju staviti odre|enu koli~inu (npr. 50 ml) DMA (Poglavlje III. stav (2) ovog aneksa). Ponovo izvagati. U DMA dodati odre|enu koli~inu (npr. O,1 g) VC (Poglavlje III. stav (1) ovog aneksa) u te~nom ili plinskom stanju, polagano ubrizgavaju}i ga u DMA. VC se tako|er mo`e dodati upuhivaju}i ga u DMA, pod uslovom da se koristi ure|aj koji }e sprije~iti gubitak DMA. Ponovo izvagati do najbli`e 0,1 mg. Ostaviti dva sata kako bi se omogu}ilo da se postigne ekvilibrij. Ako se upotrebljava interni standard, dodati interni standard tako da je koncentracija internog standarda u koncentriranom standardnom rastvoru VC ista kao i u rastvoru internog standarda pripremljenog u Poglavlje III. stav (3) ovog aneksa. Standardni rastvor ~uvati u fri`ideru. b) Priprema razbla`enog standardnog rastvora VC Uzeti izvaganu koli~inu koncentriranog standardnog rastvora VC (ta~ka a) ovog stava) i razbla`iti ga, do poznate zapremine ili poznate te`ine, sa DMA (Poglavlje III. stav (2) ovog aneksa) ili s rastvorom internog standarda (Poglavlje III. stav (3) ovog aneksa). Koncentracija rezultiraju}eg razbla`enog standardnog rastvora izra`ava se u mg/l odnosno mg/kg. c) Priprema krive o~itavanja sa rastvorom A Napomena: Kriva mora sadr`avati najmanje sedam pari ta~aka. Ponovljivost o~itavanja (1) mora biti ni`a od 0,002 mg VC/l ili kg DMA. Kriva mora biti izra~unata na osnovu ovih ta~aka tehnikom najmanjih kvadrata, tj. linija regresije mora biti izra~unata koriste}i sljede}u jedna~inu: y a x a� 1 0 gdje je: � � � � � � a n xy x y n x x 1 2 2 � � � �� �� i: � � � � � � � � � � a y x x xy n x x 0 2 2 2 � � � � � � � �� gdje je y= visina ili povr{ina najvi{ih ta~aka u bilo kojem jedinstvenom odre|ivanju, x = odgovaraju}a koncentracija linije regresije, n = broj provedenih odre|ivanja (n � 14), kriva mora biti linearna, tj. standardna devijacija (s) razlika izme|u izmjerenih o~itavanja (y 1 ) i odgovaraju}ih vrijednosti o~itavanja koje su izra~unate s linije regresije (z 1 ) podijeljeno sa srednjom vrijedno{}u (y) svih izmjerenih o~itavanja ne smije prelaziti 0,07: To se ra~una pomo}u: s y � 0 07, gdje je: � � s y z n i i i n � � � 2 1 1 i: y n y i n � � � 1 1 1 yi = svako pojedina~no izmjereno o~itavanje, zi = odgovaraju}a vrijednost o~itavanja (yi) na izra~unatoj liniji regresije, n��14 Pripremiti dvije serije od najmanje sedam cjev~ica (Poglavlje IV. stav (4) ovog aneksa). U svaku cjev~icu dodati zapreminu razbla`enog standardnog rastvora (ta~ka b) ovog stava) i DMA (Poglavlje III. stav (2) ovog aneksa) ili rastvora internog standarda u DMA (Poglavlje III. stav (3) ovog aneksa) tako da kona~na koncentracija VC rastvora duplikata bude pribli`no jednaka 0; 0,005; 0,010; 0,020; 0,030; 0,040; 0,050, itd., mg/l ili mg/kg DMA i da sve cjev~ice sadr`e istu koli~inu. Koli~ina razbla`enog standardnog rastvora VC (ta~ka b) ovog stava) mora biti takva da je odnos izme|u ukupne zapremine (�l) dodatog rastvora VC i koli~ine (g ili ml) DMA, ili rastvora internog standarda (Poglavlje III stav (3) ovog Aneksa) ne prelazi pet. Za~epiti cjev~ice i nastaviti kako je opisano u stavu (4) ta~. b), c) i e) ovog poglavlja. Konstruirati grafikon na kojem vrijednosti ordinate pokazuju povr{inu (ili visinu) najvi{ih ta~aka VC rastvora duplikata ili odnos ovih povr{ina (ili visina) s relevantnim najvi{im ta~kama internog standarda a vrijednosti abscise pokazuju koncentracije VC rastvora duplikata. (2) Validacija pripreme standardnih rastvora dobivenih u stavu (1) ovog poglavlja. a) Priprema drugog standardnog rastvora VC (rastvor B) Ponoviti proceduru opisanu u stavu (1) ta~. a) i b) ovog poglavlja da bi se dobio drugi standardni rastvor, u ovom slu~aju, koncentracije pribli`no jednake 0,02 mg VC/l, ili 0.02 mg VC/kg DMA ili rastvora internog standarda. Dodati ovaj rastvor u dvije cjev~ice (Poglavlje IV. stav (4) ovog aneksa). Hermeti~ki zatvoriti bo~ice i nastaviti kako je opisano u stavu (4) ta~. b), c) i e) ovog poglavlja. b) Validacija rastvora A Ako se prosjek dva odre|ivanja plinskom hromatografijom koji se odnose na rastvor B (stav (2) ta~ka a) ovog poglavlja) ne razlikuje vi{e od 5 % u odnosu na odgovaraju}u ta~ku na krivoj o~itavanja dobivene u stavu (1) ta~ki c) ovog poglavlja, rastvor A je validiran. Ako je razlika ve}a od 5 %, odbijaju se svi rastvori dobiveni u st. (1) i (2) ovog poglavlja i ponoviti proceduru od po~etka. (3) Priprema "adicione" krive Napomena: Kriva mora sadr`avati najmanje sedam pari ta~aka. Kriva mora biti izra~unata na osnovu ovih ta~aka tehnikom najmanjih kvadrata (stav (1) ta~ka c) ovog poglavlja). Kriva mora biti linearna, tj. standardna devijacija (s) razlika izme|u izmjerenih o~itavanja (y1) i odgovaraju}ih vrijednosti o~itavanja koje su izra~unate sa linije regresije (z1) podijeljeno sa srednjom vrijedno{}u ( y) svih izmjerenih o~itavanja ne smije prelaziti 0,07 (stav (1) ta~ka c) ovog poglavlja). a) Priprema uzorka Uzorak hrane koja }e se analizirati mora biti reprezentativan hrani koja se daje na analizu. Hrana mora biti izmije{ana ili isjeckana na male komadi}e i izmije{ana prije nego {to se uzme uzorak. b) Procedura Pripremiti dvije serije od najmanje sedam cjev~ica (Poglavlje IV. stav (4) ovog aneksa). U svaku cjev~icu dodati koli~inu, ne manju od 5 g, uzorka dobivenog iz hrane koja se ispituje (ta~ka a) ovog stava). Osigurati da se jednaka koli~ina doda u svaku cjev~icu. Odmah zatvoriti cjev~ice. Za svaki gram uzorka u svaku cjev~icu dodati 1 ml, po mogu}nosti destilirane vode, ili demineralizirane vode barem ekvivalentne ~isto}e, ili odgovaraju}eg rastvara~a ako je to potrebno. (Napomena: za homogenu hranu, nije potrebno dodavati destiliranu ili demineraliziranu vodu). U svaku cjev~icu dodati zapreminu razbla`enog standardnog rastvora VC (stav (1) ta~ka b) ovog poglavlja), koji sadr`i interni standard (Poglavlje III. stav (3) ovog aneksa), ako se smatra korisnim, tako da su koncentracije VC dodane u cjev~ice jednake 0; 0,005; 0,010; 0,020; 0,030; 0,040; 0,050, itd. mg/kg hrane. Osigurati da je ukupna zapremina DMA ili DMA koji sadr`i rastvor internog standarda (Poglavlje III. stav (3) ovog aneksa) jednaka u svakoj cjev~ici. Koli~ina razbla`enog standardnog rastvora VC (stav (1) ta~ka b) ovog poglavlja) i dodatnog DMA tamo gdje je kori{ten, mora biti takva da je odnos izme|u ukupne zapremine (�l) tih rastvora i koli~ine (g) hrane koja se nalazi u cjev~ici {to je mogu}e ni`i ali ne smije biti ve}i od pet i mora biti isti u svim cjev~icama. Za~epiti cjev~ice i nastaviti kako je opisano u stavu (4) ovog poglavlja. (4) Odre|ivanja plinskom hromatografijom a) Prodrmati cjev~ice izbjegavaju}i kontakt izme|u sadr`ane te~nosti i septuma (Poglavlje IV. stav (4) ovog aneksa) kako bi se dobilo {to je mogu}e homogeniziraniji rastvor ili suspenzija uzoraka hrane. b) Staviti sve zatvorene cjev~ice (st. (2) i (3) ovog poglavlja) u vodenu kupku na dva sata na 60 ± 1°C kako bi se omogu}ilo da se dostigne ekvilibrij. Ponovo prodrmati, po potrebi. c) Uzeti uzorak iz "headspace" prostora u cjev~ici. Kada se koriste manualne tehnike uzimanja uzorka mora se obrati pa`nja da se dobije reproduktivan uzorak (vidi Poglavlje IV. stav (4) ovog aneksa), posebno, {prica se mora prethodno zagrijati do temperature uzorka. Izmjeriti Ponedjeljak, 24. 5. 2010. S LU @ B E N I G LAS N I K B i H Broj 42 - Stranica 277 1 Vidi preporuke u ISO DIS 5725 : 1977 Broj 42 - Stranica 278 S LU @ B E N I G LAS N I K B i H Ponedjeljak, 24. 5. 2010. povr{inu (ili visinu) vrhova koji se odnose na VC i na interni standard ako je bio kori{ten. d) Konstruirati grafikon na kojem vrijednosti ordinate pokazuju povr{inu (ili visinu) najvi{ih ta~aka VC rastvora ili odnos ovih povr{ina (ili visina) s relevantnim najvi{im ta~kama internog standarda a vrijednosti abscise pokazuju koli~inu dodanog VC (mg) koja se odnosi na koli~inu odvaganog uzorka hrane u svakoj cjev~ici (kg). Izmjeriti presjek abscise na grafiku. Tako dobivena vrijednost je koncentracija VC u uzorku hrane koja se ispituje. e) Odstraniti s kolone ( Poglavlje IV. stav (3) ovog aneksa) vi{ak DMA odgovaraju}om metodom ~im se vrhovi koji proizilaze od DMA poka`u na hromatogramu. POGLAVLJE VI. REZULTATI VC koji ispu{taju materijali i predmeti u hranu koja se ispituje izra`en mg/kg definira se kao srednja vrijednost dva odre|ivanja (Poglavlje V. stav (4) ovog aneksa) pod uslovom da je ispunjen kriterij ponovljivosti iz Poglavlja VIII. POGLAVLJE VII. POTVRDA VC U slu~ajevima kada VC koji ispuste materijali i predmeti u hranu kao {to je izra~unato na osnovu Poglavlja VI., prelazi kriterij iz ~lana 2. stav (2) ovog pravilnika, vrijednosti koje su dobivene odre|ivanjem oba uzorka (Poglavlje V. stav (4) ovog aneksa) moraju biti potvr|ene na jedan od tri na~ina: (i) koriste}i najmanje jo{ jednu kolonu (Poglavlje IV. stav (3) ovog aneksa) sa stacionarnom fazom koja ima druga~iju polarnost. Ovu proceduru treba nastaviti dok se ne dobije hromatogram bez dokaza o preklapanju vrhova VC i/ili internog standarda sa sastojcima uzorka hrane, (ii) koriste}i druge detektore, npr. mikroelektrolitski detektor konduktivnosti, (iii) koriste}i masenu spektrometriju, u ovom slu~aju, ako su molekularni joni sa izvornim masama (m/e) od 62 i 64 prisutni u odnosu 3:1, mo`e se, s visokom vjerovatno}om, smatrati kao potvrda prisustva VC. U slu~aju dileme, potrebno je provjeriti ~itav maseni spektar. POGLAVLJE VIII. PONOVLJIVOST Razlika izme|u rezultata dva odre|ivanja (Poglavlje V. stav (4) ovog aneksa) koja je izvr{io simultano ili brzo jedan za drugim na istom uzorku isti analiti~ar, pod istim uslovima, ne smije prelaziti 0,003 mg VC/kg hrane.